化学发光底物APS-5及化学发光分析体系的分类简介
摘要：APS作为新型化学发光底物，以各项高效性能被广泛使用，可应用于化学发光分析，以提高化学发光分析体系的各项检测性能，本文介绍了APS5及化学发光体系的分类。
关键词：APS5，Lumigen，化学发光分析，化学发光底物
前言
APS-5，中文名：（4-氯苯巯基）（10-甲基-9,10-二氢化吖啶亚甲基）磷酸二钠盐，英文名称：[(4-chlorophenyl)thio](10-methyl-9(10H)-acridinylidene)methanol 1-(dihydrogen phosphate) disodium salt；类白色固体粉末，CAS号: 193884-53-6[1]。APS5是一种新型化学发光底物，它现在已经作为发光探针被用于基因芯片的研究中，是美国Lumigen公司于2011年研发出的新产品，其在均相碱性磷酸酶检测中的应用表现出超高的灵敏度，（可以检测到小于10-19mol的碱性磷酸酶），能迅速达到峰值以减少检测时间，增加通过量，线性校准曲线的斜率是以重对数等于1.0绘制的。一个数量及以上的酶产生一个数量及以上的发光量，持续发光——对测定时间的要求并不高。发光强度可以在任何时间从产生的线性校准曲线上读取，分析结果对温度在22°C—35°C范围内不敏感，降低控制温度所需的精确度。APS - 5采用了独特的技术，在化学发光检测过程中，为碱性磷酸酶偶联提供优越的灵敏度和易用性。反应由acridan(9,10-二氢吖啶)作为底物和碱性磷酸酶标记，生产持续高强度的化学发光。APS - 5是溶液分析法测定磷酸酶活性和磷酸酶酶联免疫检测非常理想的解决方案。目前，国内市场主要以进口代理为主，而苏州亚科化学便是一家APS5的供应商。
化学发光分析简介[2]
化学发光的最新发展主要在原有发光试剂及体系的基础上,研究合成新的发光试剂,建立新的发光体系,与其它技术,如流动注射技术(FIA)、高效液相色谱(HPLC)、固定化试剂技术、传感器技术以及生化免疫技术等联用,拓宽了化学发光的应用范围。化学发光与生化免疫分析相结合,开创了化学发光分析的新领域。由于其非放射性、灵敏度高和操作方便,已成为生化免疫分析的一个重要手段,对于酶、三磷酸腺苷(ATP)、抗原、抗体、激素等生物活性物质的分析发挥着愈来愈重要的作用。
化学发光分析的分类
鲁米诺类(luminol)
鲁米诺(5-氨基-邻苯二甲酰肼)是使用最广泛的化学发光试剂之一,许多化合物的分析都是采用鲁米诺发光体系。最近人们合成了一些新的衍生物。庄惠生等[7]研究了异硫氰酸异鲁米诺的电致化学发光性质及其反应机理。
光泽精(lucigenin)和吖啶酯(acridinium ester)
光泽精是使用较早的一种发光试剂,现在仍用于化学发光分析,例如,用光泽精发光体系测定金属离子、抗坏血酸以及碱性磷酸酶等。60年代以半个光泽精分子独自合成了一组吖啶酯，它亦是一种很好的发光试剂。
过氧草酸盐类(peroxalate)
60年代开始报道了一类新的发光体系,即含草酸基团的衍生物,其典型化合物有双[2,4-二硝基苯基]草酸酯(DNPO)、双[2,4,6-三氯苯基]草酸酯(TCPO)。Kwakman等对液相色谱过氧草酸酯化学发光检测作了评述。和田光弘对1, 1c-草酰二咪唑作为发光剂在PO-CL中的应用作了评述。Jonsson等研究了杂环化合物在PO-CL中的催化作用。最近Barnett等设计合成了草酰双三氟甲基磺酰基亚胺基-双苯基-4-4c-二磺酸及2,2c-草酰双三氟甲基磺酰基亚胺基-双乙苯基-4d-4Ê-二磺酸两种新的草酰胺用于水溶性过氧草酸酯发光体系。
1,2-二氧杂环丁烷类
1, 2-二氧杂环丁烷类的化学发光也研究得比较多,这类化合物经单分子转变后生成两个含羰基的产物,产物之一可生成激发态。由于许多化学发光和生物发光的中间体都可能生成这种过渡态而早已受到人们的注意。Kamtekar等[18]利用碱性磷酸酶(ALP)催化1,2-二氧杂环丁烷的磷酸盐衍生物的水解产生化学发光来测定Zn、Be、Bi。
钌(II)的联吡啶(bipy)及邻菲咯啉(phen)配合物
Ru( bipy)32+是一种被广泛研究的化合物,其化学发光及电致化学发光应用逐渐增多; Ru( phen)32+也可用作化学发光试剂。何治柯等用Ru( bipy)32+及Ru( phen)32+化学发光法在酸性介质中测定草酸、酒石酸[21, 22]及5种羟基酸等。其化学发光反应机理也已有报道。
其它发光试剂
除了上述几类主要的化学发光试剂外,还有芳基咪唑类如洛粉碱、多元酚类如连苯三酚,在H2O2存在下产生发光[24]。四-(N-烷基氨基)-乙烯类化合物也会产生化学发光。