HPLC法测定不同厂家牡丹皮中丹皮酚的含量
作者：张咏梅，刘晓燕，张月婵   
作者单位：张家港市中医医院(江苏 张家港 215600)

【摘要】  目的：建立测定不同厂家牡丹皮药材中丹皮酚含量的高效液相色谱法。方法：以Hypersil C18柱(5μm，4.6mm×250mm)为色谱柱，流动相为甲醇-水(45:55)，流速为1.0mL/min ，检测波长为274nm。结果：丹皮酚线性范围为0.026416～0.079248μg，r2=0.9999;平均回收率为98.325% ，RSD 为1.22%。结论：采用HPLC 以丹皮酚含量为指标比较牡丹皮饮片质量，该法简便易行。

【关键词】  牡丹皮;丹皮酚;HPLC

Determination of Paeonol in Cortex Moutan by HPLC

　　Zhang Yongmei,et al

　　Zhangjiagang City Hospital of TCM(Zhangjiagang 215600)

　　Abstract：Objective：To establish HPLC method for the determination of paeonol in Cortex Moutan from different factories.Methods：The Hypersil C18(4.6mm×250mm，5μm)was used with methanol：water(45：55)as mobile phase.The flow rate was 1.0 mL·min-1.The detecting wavelength was 274 nm .Results：The linear of paeonol was in the range of 0.026416～ 0.079248μg，r2=0.9999.The average recovery was 98.325% and RSD was 1.22%.Conclusion：The method was simple，reliable， accurate and suitable for the quality control of paeonol in Cortex Moutan.

　　Key words：Cortex Moutan;paeonol;HPLC

　　牡丹皮为《中国药典》收载的常用中药，系毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮，具清热凉血、活血祛瘀之功效[1]，研究发现牡丹皮还具有抗炎、镇静、降压、抗血栓、抗动脉粥样硬化和抗心率失常等作用。牡丹皮主要含有丹皮酚、芍药苷、羟基芍药苷、苯甲酰基芍药苷以及苯甲酰羟基芍药苷等成分[2,3]，丹皮酚(paeonol)是牡丹皮中的主要有效成分之一, 大量药理实验证明,丹皮酚具有抗炎、降压以及对中枢神经系统作用[4,5], 另有研究指出丹皮酚还具有抗肿瘤的作用[6]。 因此可以采用丹皮酚的含量高低作为衡量牡丹皮品质优劣的一种重要指标。目前常采用高效液相色谱法,以丹皮酚作为定量指标控制牡丹皮的质量[7-8]。

　　本实验参考现行版中国药典一部“牡丹皮”项下丹皮酚的含量测定方法，用HPLC对市售五个厂家的牡丹皮进行品质评价，便于药品采购人员以及临床医生对不同产地丹皮的正确认识与使用。

　　1 仪器及试药

　　1.1 仪器

　　岛津LC-10AT高效液相色谱仪，SPD-10A检测器;HW-2000色谱工作站(上海千普软件有限公司);色谱柱：Hypersil C18 ( 中科院大连化学物理研制所，250×4.6nm,5μm);TG328A电光分析天平;2102T超声波清洗器(上海安谱科学仪器有限公司);DHG-9053A型电热恒温鼓风干燥箱。

　　1.2 试药

　　丹皮酚(中国药品生物制品检定所，批号：0708-9704，供含量测定用);甲醇为高效液相色谱纯(美国沃凯公司生产，国药集团化学试剂有限公司分装)，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

　　牡丹皮各样品由本地五家药材公司提供，以批号代替该厂家，分别编号为：S1- 081201，S2- 081110，S3- 081128，S4- 080909，S5- 081111。均经鉴定为毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的根皮。留样凭证存放于张家港市中医医院制剂室。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件

　　色谱柱：反相C18柱: Hypersil ODS C18柱(5μm，4.6mm×250mm);流动相:甲醇-水(45：55);流速:1.0mL/min。测定波长:274nm。

　　2.2 样品的制备方法

　　2.2.1 对照品溶液的制备

　　精密称取丹皮酚对照品适量，加甲醇溶解，制得6.604μg/ml的贮备液。

　　2.2.2 供试品溶液的制备[1]

　　将已编号的牡丹皮药材干燥并粉碎，过40目筛，精密称定粉末0.5g，置具塞三角瓶中，精密量取甲醇50ml,密塞，摇匀，称定重量，超声处理30min，取出放冷，称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取续滤液1ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，取适量经微孔滤膜(0. 45μm )过滤，即得。

　　2.3 线性关系的考察

　　取丹皮酚对照品溶液，分别精密吸取4、6、8、10、12μl，注入高效液相色谱仪进样器，测定，以峰面积为纵座标(Y)，对照品进样量(μl)为横座标(X)，绘制标准曲线，得回归方程：Y = 30282X-3583.8，R2 = 0.9999。丹皮酚进样量在0.026416～0.079248μg范围内，与峰面积之间呈良好线性关系。结果见表1。表1 丹皮酚的线性关系考察

　　2.4 精密度试验

　　在上述色谱条件下,吸取对照品溶液10μl，连续测定5次，结果见表2。结果表明该法精密度良好。表2 丹皮酚的精密度试验结果

　　2.5 稳定性试验

　　取批号为20081110的牡丹皮粉末0.5g，按供试液制备法制备。样品于0小时、2小时、4小时、6小时及8小时，分别进样5μl分析。RSD=0.99%，说明供试液中丹皮酚在8小时内稳定，结果见表3。表3 稳定性考察结果

　　2.6 重复性试验

　　按拟定的含量测定方法，取批号为20081110的牡丹皮粉末，分别精密称取5份，每份约0.5g，按供试液制备法制备，即得5份供试液，分别吸取5μl，依法测定，计算含量，结果见表4。结果表明，该法重复性良好。表4 药材中丹皮酚的重复性试验结果

　　2.7 加样回收率试验

　　取重复性试验中含量已测定的牡丹皮药材粉末(批号20081110)进行加样回收试验。称取牡丹皮粉末约0.25g共六份，分别加入丹皮酚对照品(样品含量的80%、100%和120%)，按供试液制备法制备，即得6份供试液，依法测定，计算含量，测定结果见表5。结果表明，该法回收率良好。表5 丹皮酚的加样回收率试验结果

　　按拟定的含量测定方法，取已编号的五批样品,分别精密称取约0.5g，按供试液制备法制备，精密吸取5μl注入高效液相色谱仪。测定结果见图1、表6。表6 牡丹皮中丹皮酚含量测定结果

　　3 讨论

　　3.1 实验结果可见，除081111批号生产厂家未符合2005版中国药典牡丹皮项下以丹皮酚(C9H10O3)计不得少于1.2%的规定外，其余样品都达到含量限定要求。其中081201批号牡丹皮丹皮酚含量最高。分析原因牡丹皮有效成分含量可能因产地、采收季节、储藏、炮制方法、提取工艺等条件不同,都会有较大差异。

　　3.2 不同产地牡丹皮中丹皮酚的含量有很大差异，提示饮片采购员以及临床中医师对不同产地牡丹皮有正确的认识，同时为饮片采购员提供进货依据,并为临床中医师提供处方用量参考。

　　3.3 牡丹皮的商品规格按产地加工不同主要有原丹皮和刮丹皮两种。范明等[9]通过实验，发现一般原丹皮的丹皮酚含量普遍高于刮丹皮。提示，牡丹皮表皮也含有一定量的丹皮酚。建议可考虑简化药材采收加工时趁鲜刮去牡丹皮表层黑皮这道工序。

【参考文献】
  　[1] 中华人民共和国药典一部[S].北京：化学工业出版社，2005 版：119.

　　[2] 肖培根.新编中药志[M],第三卷:北京:化学工业出版社.601～606.

　　[3] 李方军.牡丹皮化学成分及药理作用研究进展[J].安徽医药,2004,8(1):9～10.

　　[4] 李群爱.牡丹皮的药理研究[J].中草药,1988,19(6):36.

　　[5] 王爱宝,唐希灿.丹皮酚磺酸钠的镇痛,解热,消炎和毒性研究[J].中草药,1983,14(10):26.

　　[6] 孙慧群，王晓琦，于丽繁，等.丹皮酚对MDR逆作作用研究[J].解剖科学进展，2000，6(1)：59-61.

　　[7] 徐树芸,王海宁.反向高效液相色谱法测定牡丹皮药材中丹皮酚的含量[J].贵州医药,2004,28(11):1021-1022.

　　[8] 姜潇,张广宏,刘学起.HPLC法测定牡丹皮中丹皮酚的含量[J].齐鲁药事，2004,23(6):31.

　　[9] 范明,邱燕,范榕.不同产地牡丹皮中丹皮酚的含量测定[J].福建中医药，1999,30(40):41.