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玻尿酸合成

非售品
CAS:9004-61-9
分子式:
分子量:

方法一、以公鸡冠为原料
取鸡冠丙酮脱水,粉碎,加蒸馏水浸泡24h,充分溶胀后,过滤,滤渣用蒸馏水反复提取3次,合并滤液,加入100g/L(10%)氯化钠,溶解后,加入等体积的氯仿,搅拌3h,分出水相,再加2倍体积的95%乙醇沉淀透明质酸,脱水,干燥,得粗品。

鸡冠[丙酮]→脱水碎鸡冠[蒸馏水]→[24h]滤液[NaCl, 氯仿]→水相[95%乙醇]→透明质酸沉淀→粗品

将粗品溶于0.1mol/L氯化钠溶液中,用稀盐酸调pH 4.5-5,加入等体积的氯仿搅拌,处理2次,水相用NaOH液调pH 7.5,加链霉蛋白酶37℃保温24h,酶解液用氯仿处理2-3次,水相加等体积10g/L(1%)氯化十六烷基吡啶溶液,放置沉淀,沉淀物加0.4mol/L氯化钠溶液搅拌解离,离心,分取上清液,用3倍体积的95%乙醇反复沉淀,脱水,干燥即得精品。

粗品[0.1mol/L NaCl]→溶解液[稀HCl, 氯仿]→[pH4.5]水相[NaOH, 键霉蛋白酶]→[pH7.5, 37℃, 24h]酶解液[氯仿]→水相[氯化十六烷基吡啶]→沉淀[NaCl]→上清液[95%乙醇]→沉淀→精制品

国外文献报道,用蒸馏水可从鸡冠中提取93%的透明质酸,粗品的回收率在90%以上,总收率高达6%。

方法二、人脐带为原料
取丙酮脱水脐带碎块加入蒸馏水浸泡24h,提取,反复提取4次,过滤,合并滤液。
脐带[丙酮]→脱水脐带碎块[蒸馏水]→[24h]提取液→滤液

将上述滤液中加100g/L(10%)的氯化钠搅拌溶解,用稀盐酸调pH 5,再加等体积氯仿搅拌处理,待分层后分出水相,同样操作处理2次,然后用稀氢氧化钠调pH 7.5,加4g/L(0.4%)链霉蛋白酶,置37℃水浴保温24h,酶解液加等体积氯仿反复处理,然后用3倍体积的95%乙醇沉淀出透明质酸。收集浮于乙醇液上部的纤维状沉淀和底部的粉状沉淀,分别脱水,干燥,即得透明质酸组分I和组分Ⅱ。

滤液[NaCl, 稀HCl,氯仿]→[pH5]水层[NaOH, 链霉蛋白酶]→[pH7.5, 37℃, 24h]酶解液[氯仿,乙醇]→透明质酸

将透明质酸组分I溶于生理盐水中,通过6号垂熔漏斗过滤除菌,用无菌丙酮沉淀透明质酸,过滤,干燥,再溶于适量的无菌缓冲液中,配成1%溶液,无菌分装即得注射剂。总收率为丙酮脱水脐带块的2%。

方法三、皮肤为原料的制法
Shimada和Matsumura曾设计了两种不同的方法。

第一种制备法,将冻干的兔皮块,磨碎,丙酮脱脂,加0.5mol/L氯化钠溶液制匀浆,用氯化十六烷基吡啶沉淀,连续溶于浓度递增的氯化钠溶液中,然后溶于0.5mol/L氯化钠溶液中,0.5mol/L氯化钠组分进一步用DEAE-Sephadex层析法纯化,得透明质酸,相对分子量1×104-7.2×104。

第二种制法,兔皮块直接脱脂(不冻干和机械粉碎),悬浮于水中,100℃加热提取,提取物用链霉蛋白酶和Dnase处理,经Sephadex G-75和Sepharose 4B进一步纯化制得。相对分子量1.6×105-1.3×106。两种方法收率近似,第一种方法可能由于机械处理使透明质酸降解。

方法四、羊眼球为原料的制法
取冷冻的羊眼球用水解冻,剥出玻璃体,融化离心,分出上层清液,加入丙酮,放置,离心,沉淀溶于1mol/L氯化钠溶液中,搅拌,离心。上层清液加入三氯乙酸,离心,分出上层清液,用氯氧化钠调pH至中性,加3倍量的95%乙醇沉淀,再经乙醇、丙酮脱水,置P2O5真空干燥器干燥得透明质酸钠粗品,收率占玻璃体干重的2.8%。

将粗品溶于氢氧化钠溶液中,加入处理好的漂白土吸附,离心,收集上清液,加入溴代十六烷基吡啶(CPB)溶液,得透明质酸钠-CPB复合物沉淀。取沉淀经洗涤,用0.4mol/L氯化风俗进行解离,抽滤,收集清液,加乙醇沉淀,再经乙醇、丙酮脱水,置P2O5真空干燥器干燥得透明质酸钠精品,收率占粗品干重的62%,总收率为1.8%。